Очень часто, перед тем как назначить лечение и выписать соответствующие лекарственные препараты, врачи проверяют человека на чувствительность к антибиотикам. Делается это несколькими методами.
Итак, выявление чувствительности или сопротивляемости микроорганизмов к антибиотикам необходимо для назначения правильного метода лечения. Так, например, если у возбудителей инфекции наблюдается резистентность к определенному препарату, то лечение им просто не будет оказывать должного эффекта. Различают несколько форм сопротивляемости:
- чувствительные;
- умеренно чувствительные;
- устойчивые.
Чувствительные микроорганизмы погибают сразу же после введения небольших доз, а умеренно чувствительные – при определенных концентрациях. При этом устойчивые могут погибнуть только при взаимодействии с большим количеством антибиотика, который не может быть введен в организм, а, следовательно, необходимо искать альтернативный способ лечения и устранения заболевания.
Существует несколько способов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам:
- метод последовательных разведений в жидкой питательной среде;
- метод диффузии в агар;
- ускоренный метод.
Чаще всего проба на чувствительность к антибиотикам проводится по методу определения в физиологической жидкости. В этом случае используется процесс обработки интегрированных пластин с различной концентрацией антибиотиков. Таким методом определяют больных раком, для того чтобы подтвердить или опровергнуть эффективность назначенных препаратов при химиотерапии.
Анализ на чувствительность к антибиотикам по диффузионному методу почти так же распространен, как и первый. При этом он дает лишь качественный ответ, есть или нет сопротивляемость.
Благодаря развитию микробиологических технологий, появились ускоренные методы диагностики, которые дают полную и развернутую информацию. Это очень важно при назначении лекарственных препаратов, а также, когда время не терпит, и следует как можно быстрее приступить к лечению.
Случается иногда так, когда результатов и вышеуказанных методов исследования недостаточно. В этом случае выводят минимальную бактерицидную концентрацию, которая способна уничтожить возбудителя инфекции, только происходит это в течение определенного промежутка времени.
Резистентность к антибиотикам – это способность патогенных бактерий проявлять устойчивость к воздействию терапевтических концентраций антибактериальных препаратов. Устойчивость к антибиотикам разделяют на врожденную и приобретенную. Под врожденной резистентностью подразумевают отсутствие у бактерии мишени, на которую может действовать применяемый антибиотик, слишком низкую проницаемость бактериальной мембраны для препарата, способность инактивировать лекарство при помощи ферментов либо активно выводить его из бактериальной клетки.
Приобретенная устойчивость возникает как следствие мутации возбудителя, благодаря которой он может свободно переносить концентрации антибиотика, достаточные для инактивации других бактерий данного вида.
Во многих странах наблюдается тенденция к росту резистентности E. Coli (основного возбудителя инфекций мочевыводящих путей) к фторхинолонам и цефалоспоринам. Все чаще регистрируются случаи устойчивости бактерий к препаратам резерва для данной инфекции (карбапенемы для Klebsiella pneumonia, 3-е поколение цефалоспоринов для гонореи) и т.д. То есть, те заболевания, которые на протяжении многих лет эффективно лечились антибактериальными препаратами сегодня, снова представляют опасность для населения.
В некоторых случаях, тест на чувствительность к антибиотикам показывает частичную или полную устойчивость к большинству «классических» для данной инфекции антибиотиков.
Такая неутешительная картина связана с частым нерациональным и необоснованным применением противомикробных средств. Многие пациенты покупают лекарства не по назначению врача, а по рекомендации друзей, фармацевтов в аптеке, после просмотра рекламы или просто вспомнив, что когда-то этот препарат уже помогал. Также, у многих существуют «любимые» лекарства, которые принимаются по несколько дней при первых признаках заболевания.
Важно понимать, что самоназначение антибиотиков, самостоятельная коррекция назначенных дозировок, кратности приема и длительности курса способствует формированию и распространению бактерий с приобретенной устойчивостью к антибиотикам.
Читайте далее: Мазок из зева на микрофлору и чувствительность к антибиотикам
Вторичная (приобретенная) резистентность к антибиотикам развивается за счет спонтанных мутаций в геноме микробной клетки после контакта с противомикробным средством. Важной особенностью данных мутаций является их способность «запоминаться» бактериями и передаваться следующим поколения патогенов. Это способствует быстрому распространению устойчивых штаммов в окружающей среде.
Степень резистентности (сниженная чувствительность к антибиотикам или полная устойчивость), а также скорость ее развития зависит от видов и щтаммов бактерий.
Быстрее всего под действием антибиотиков мутируют:
- стафилококки (грамположительные кокки);
- эшерихии (грамотрицательные бактерии);
- микоплазмы (внутриклеточные возбудители);
- протей (грам- бактерии);
- синегнойная палочка (грамотрицательные бактерии).
Достаточно редко встречаются антибиотикорезистентные стрептококки группы А, клостридии, сибироязвенные и гемофильные палочки.
Среди механизмов формирования устойчивости, на данный момент наиболее важными считают:
- ферментную инактивацию антибиотика;
- модификацию молекул-мишеней в микробной клетке;
- способность возбудителей активно выводить антибиотик (эффлюкс);
- снижение проницаемости микробной мембраны для лекарства.
Поскольку активное выведение и нарушение проницаемости основаны на ограничении доступа антибиотика в бактериальную клетку, их часто объединяют в один механизм резистентности.
В связи с ростом резистентности ко многим противомикробным средствам, определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам позволяет проводить противомикробную терапию максимально рационально и эффективно.
Что значит чувствительность к антибиотикам?
Всех возбудителей инфекционно-воспалительных болезней можно разделить на:
- чувствительные;
- малочувствительные;
- полностью устойчивые.
Если рост и размножение бактерий на питательной среде подавляются терапевтическими дозировками антибиотиков, то бактерии считаются чувствительными. Малочувствительные штаммы, реагируют только на максимальные дозировки лекарственного средства.
Резистентными к антибиотику считаются патогены, которые ингибируются только критически высокими дозами антибактериальных средств, достичь которых можно исключительно в условиях лаборатории, но не в человеческом организме.
Этиотропное назначение противомикробных препаратов основывается на выделении возбудителя с дальнейшим определением чувствительности к антибиотикам. Этот анализ позволяет получить эпидемиологические показатели устойчивости патогенных микроорганизмов в определенном регионе, а также изучить структуру внутрибольничных и внебольничных инфекций.
При проведении пробы на чувствительность к антибиотикам, необходимо соблюдать определенный алгоритм действий и четко соблюдать все звенья бактериологической диагностики.
Этапность исследования состоит из:
- забора материала;
- доставки в лабораторию;
- посевов на специальные среды;
- выделения вида и штамма возбудителя;
- изучения чувствительности к противомикробным средствам.
Важно понимать, что достоверные данные анализа можно получить только при правильном выполнении всех этапов диагностики.
Читайте далее: Расшифровка посева на флору с определением чувствительности к антибиотикам
Как сделать пробу на антибиотик?
Наиболее популярным качественным методом диагностики считается диффузия в агар с использованием метода дисков. Для того, что бы изучить чувствительность к антибиотикам при помощи диффузии с дисками, необходимо засеять исследуемым патогенном питательную среду с агаром и поместить сверху диски с антибактериальными препаратами. Далее, чашка Петри с образцами выдерживается в термостате при температуре от 35 до 37 0С в течение суток. По истечению 24 часов оценивают зоны ингибирования роста бактерий вокруг дисков. Данный метод диагностики является качественным, то есть диффузия-дисками определяет — чувствителен возбудитель к антибиотику или нет.
Для оценивания степени чувствительности измеряют зону ингибирования роста. При полной резистентности бактерии к антибиотику зона задержки полностью отсутствует.
О слабой чувствительности говорит задержка до 1.5 сантиметра. Препараты с такими показателями являются неэффективными для эрадикации исследуемого возбудителя.
Умеренно эффективными (показатели стандартной чувствительности) являются антибиотики с задержкой роста от 1.5 до 2.5 сантиметров. О высокой чувствительности свидетельствует зона ингибирования роста более 2.5 сантиметров.
Кроме диско-диффузного метода могут применяться полоски E-тестов. Алгоритм действий аналогичен предыдущему, только вместо пропитанных противомикробным средством дисков используют полоску с Е-тестом, содержащую разметку с градиентом концентраций изучаемого антибиотика (от максимума к минимуму). Полоски с Е-тестом
Важно помнить, что диффузные методы неэффективны для выявления МКП (минимальные концентрации подавления) полипептидных антибиотиков с плохой диффузией в агар. То есть для полимиксина, ристомицина и т.д. предпочтительнее использовать серийное разведение.
Количественные методы используются для выявления МКП и минимальных концентраций бактерицидного действия. То есть, с их помощью можно определить минимальный уровень антибиотика, который будет предотвращать видимый рост бактерий.
При помощи методов разведения можно рассчитать необходимую дозу препарата (терапевтическая концентрация в крови должна значительно превышать МКП). При использовании метода серийного разведения, вначале готовится основной р-р, со строго определенной концентрацией антибиотика в специальной питательной среде. Из него готовятся все последующие разведенные р-ры.
Далее, в каждую пробирку (чашку Петри) с разведениями добавляют изучаемую культуру возбудителей. После этого, все посевы подвергаются инкубации в термостате при температуре 370С на одни сутки. По окончанию инкубации оценивают результаты и выявляют МКП по отсутствию зоны роста (в чашке Петри) или помутнения (среды в пробирке).
Оценивание результатов проводится при помощи специальных таблиц с стандартными показателями диаметров ингибирования роста и МКП для резистентных (для этих штаммов указывается только зона ингибирования роста), малочувствительных и чувствительных.
Статья подготовлена
врачом-инфекционистом Черненко А. Л.
Читайте далее: Как сдавать посев мочи на флору и чувствительность к антибиотикам?
Остались вопросы? Получите бесплатную консультацию врача прямо сейчас!
Нажатие на кнопку приведет на специальную страницу нашего сайта с формой обратной связи со специалистом интересующего Вас профиля.
Бесплатная консультация врача
Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и химиопрепаратам – это свойство микроорганизмов реагировать на действие данных препаратов приостановкой размножения или гибелью. Каждый вид или близкая группа видов имеют характерный спектр и уровень природной чувствительности по отношению к определенному препарату или группе препаратов.
Для успешного проведения лечения антибиотиками, особенно в случаях хронической инфекции, необходимо предварительно определить степень чувствительности к антибиотикам микробов, вызвавших заболевание.
Мерой чувствительности микробов является минимальная концентрация препарата (мкг/мл), которая подавляет рост микробов на питательных средах в стандартных условиях постановки опыта. Выделяют 3 категории чувствительности-устойчивости микробов:
а) чувствительные подавляются при назначении обычных доз антибиотиков;
б) умеренно-устойчивые штаммы микробов подавляются при введении максимальных доз препарата;
в) устойчивые штаммы микробов не подавляются при введении в организм человека максимально допустимых доз.
В настоящее время для определения чувствительности микробов к антибиотикам применяют 3 метода: диффузии препарата в плотную питательную среду из бумажных дисков; серийные разведения в бульоне; в бактериологических анализаторах с количественной регистрацией результатов – определение минимальной ингибирующей концентрации.
В связи с широким распространением приобретенной устойчивости среди различных видов микроорганизмов необходимо перед назначением антибиотикотерапии провести выделение возбудителя заболевания в чистой культуре с последующим определением спектра чувствительности к антибиотикам. Обязательному исследованию на антибиотикочувствительность подлежат все микроорганизмы, выделенные из первично стерильных жидкостей, органов и тканей человека (кровь, спинномозговая жидкость, моча и т.д.). В бактериологической лаборатории МК ТюмГМА имеется бактериологический анализатор, что позволяет определить чувствительность микроорганизмов не только диско-диффузионным методом, но и минимальную ингибирующую концентрацию автоматизированным методом в анализаторе.
В.Н. Самикова,
Заведующая бактериологической лабораторией
Многопрофильной клиники ТюмГМА, к.б.н.
Анализ на чувствительность к антибиотикам является обязательным при возникновении у врача подозрений, что заболевание пациента имеет бактериальную природу. Это связано с тем, что медики пытаются контролировать назначение данных препаратов, чтобы не стимулировать мутации и не вызывать резистентность у микроорганизмов.
Анализ на чувствительность к антибиотикам – это лабораторный способ выявления препарата, который будет оказывать наибольшее действие на патогенную флору в данном конкретном случае болезни.
На данный момент антибактериальная терапия применяется достаточно широко там, где она нужна, а также в тех случаях, когда это совсем не обязательно, для перестраховки от возможных осложнений. Например, после кесарева сечения, лапароскопических операций, удаления конкрементов из почек или мочеточников и т. д.
Фармацевтическая промышленность может предложить широкий выбор препаратов как в плане цены, так и в плане действенности. Для того чтобы не «тыкать пальцем в небо» и назначить эффективный антибиотик, нужно провести посевы на чувствительность.
Перед тем как врач подберет терапию, пациенту необходимо сдать некоторые анализы. Посев на чувствительность к антибиотикам назначается, если необходимо определить лекарство, которое в данном случае будет наиболее уместно. Чаще всего это исследование назначается для лечения заболеваний, передающихся половым путем, или ЗППП. Для детей же необходимость в определении антибиотика – это обязательное условие.
Кроме того, определение чувствительности нужно, чтобы избежать устойчивости бактерий к лечению. Если пациента недавно лечили антибиотиками, и теперь вновь необходим повторный курс, то требуется замена препарата. Это позволит использовать меньшие дозы лекарства и не вызывать мутации у возбудителя. В гнойных хирургических отделениях антибиотики меняют каждые два-три месяца.
Данный анализ необходим еще в том случае, если на основную группу антибиотиков у больного возникает аллергическая реакция.
Анализ мочи на чувствительность к антибиотикам, и не только ее, можно провести несколькими способами. Первый из них – это метод дисков. Проводят его следующим образом. В чашку Петри заливают агар, а когда он застынет, специальным инструментом наносят исследуемый материал. Затем по поверхности агара раскладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками. После чашку закрывают и ставят в термостат. Постепенно диск погружается в желатин, а антибиотик диффундирует в окружающее пространство. Вокруг бумаги образуется зона «подавления роста». Чашки проводят в термостате двенадцать часов, затем их вынимают и измеряют диаметр вышеуказанной зоны.
Второй способ – это метод Е-теста. Он похож на предыдущий, но вместо бумажных дисков используют полоску, которая на своем протяжении в разной степени пропитана антибиотиком. После двенадцати часов экспозиции в термостате чашку Петри достают и смотрят, в каком месте зона подавления роста соприкасается с полоской бумаги. Это будет наименьшая концентрация препарата, которая необходима для лечения заболевания.
Достоинством этих тестов является быстрота и простота их проведения.
Анализ на флору и чувствительность к антибиотикам можно провести и другим способом. Этот метод основан на последовательном уменьшении концентрации антибиотика (от максимальной до минимальной) с целью определить, в какой из пробирок прекратится сдерживание роста бактерий.
Сначала подготавливают растворы препарата. Затем их вносят в жидкую среду с бактериями (бульон или агар). Все пробирки на ночь (то есть 12 часов) помещаются в термостат при температуре 37 градусов, а утром проводят анализ получившихся результатов. Если содержимое пробирки или чашки Петри мутное, это свидетельствует о росте бактерий и, следовательно, неэффективности антибиотика в данной концентрации. Первая пробирка, в которой визуально не будет определяться рост колоний микроорганизмов, будет считаться достаточной концентрацией для лечения.
Это разведение препарата принято называть минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Она измеряется в миллиграммах на литр или микрограммах на миллилитр.
Анализ на чувствительность к антибиотикам нужно уметь не только правильно сделать, но и грамотно расшифровать. Основываясь на получаемых результатах, все микроорганизмы делят на чувствительные, умеренно резистентные и резистентные. Для того чтобы различать их между собой, используются условные пограничные концентрации препаратов.
Эти значения не являются постоянными и могут изменяться в зависимости от приспосабливаемости микроорганизмов. Разработкой и пересмотром этих критериев поручено заниматься химиотерапевтам и микробиологам. Одной из официальных структур такого рода является Национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам США. Разработанные ими стандарты признаны во всем мире для использования в оценке активности антибиотиков, в том числе для рандоминизированных многоцентровых исследований.
Различают два подхода к оценке результатов анализа на чувствительность к антибиотикам: клинический и микробиологический. Микробиологическая оценка ориентируется на распределение эффективных концентраций антибиотика, а клиническая — на качество антибактериальной терапии.
Анализ — определение чувствительности антибиотикам — назначается с целью выявить чувствительные и устойчивые микроорганизмы.
Чувствительными называются возбудители, которые поддаются лечению антибиотиками в средней терапевтической концентрации. Если достоверная информация о категории чувствительности микроорганизма отсутствует, то учитываются данные, полученные в условиях лаборатории. Они совмещаются со знаниями о фармакокинетике используемого препарата, и после синтеза данной информации делается вывод о восприимчивости бактерий к лекарству.
К резистентным, то есть устойчивым, микроорганизмам относятся те бактерии, которые продолжают вызывать заболевания даже при использовании максимальных концентраций лекарственных веществ.
Промежуточную резистентность устанавливают в том случае, если заболевание в процессе лечения может иметь несколько исходов. Выздоровление пациента возможно в случае использования высоких доз антибиотиков либо в случае прицельного накапливания лекарства в месте инфекции.
Анализ на микрофлору и чувствительность к антибиотикам определяет такой показатель, как минимальная бактерицидная концентрация, или МБК. Это самая низкая концентрация препарата, которая в лабораторных условиях вызывает элиминацию практически всех микроорганизмов в течение двенадцати часов.
Знание этого показателя врачи используют, когда назначают терапию не бактерицидными, а бактериостатическими лекарственными средствами. Или в случаях, когда стандартная антибактериальная терапия оказывается неэффективной. Чаще всего этот анализ заказывают для больных с бактериальным эндокардитом, остеомиелитом, а также при оппортунистических инфекциях.
Анализ на чувствительность к антибиотикам может проводиться с использованием биологических жидкостей:
— слюна;
— кровь;
— моча;
— сперма;
— грудное молоко.
Кроме того, для определения местной чувствительности производят забор мазков из уретры, цервикального канала и верхних дыхательных путей.